מאז תרופות פפטיד חלבון הן בעיקר חומרים ביו-אקטיביים

כיוון שתרופות פפטידים חלבון הן בעיקר חומרים ביו-אקטיביים, והפעילות הביולוגית לא תלויה רק ​​במבנה הראשוני של התרופה, אלא גם קשורה קשר הדוק למבנים המשני והשלישוני, ביו-assay היא שיטה ייחודית והכרחית לחקר הפרמקוקינטיקה של מחלקה זו. לבדיקות ביולוגיות שתי מטרות, קביעה ישירה של ריכוזי תרופות בנוזלי גוף וזיהוי הפעילות הביולוגית של תרופות מסומנות. ניתן לחלק את שיטותיו לשתי קטגוריות עיקריות.
1.1.1 ניתוח In vivo שיטה קונבנציונלית של גלוקוז בדם עכברים עם אינסולין וכו', בנוסף לשיטות שונות שנקבעו על פי הפעילות הביולוגית של סוגים שונים של פוליפפטיד חלבון, כגון ניוטרופילים של גיוס IL-8 בניסויים בארנבות. לאופי של IL-8 יכול לגייס מספר רב של נויטרופילים מהעצם [1]. שיטה מסוג זה משקפת באופן האינטואיטיבי ביותר פעילות ביולוגית, אך מערבת את כל החיה, היא גוזלת זמן ומייגעת, בעלת רגישות נמוכה ובעלת שונות גדולה.
1.1.2 אנליזה של רקמות (תאים) in vivo כגון NGF ממריץ את הצמיחה של גרעיני שורש גב עוף, אוקסיטוצין בשיטת הרחם של חולדה ex vivo וכו'. עם התפתחות הביולוגיה המולקולרית, הוקמו קווי תאים תלויים ספציפיים ורגישים רבים, ותרבות תאים הפכה לשיטה הנפוצה ביותר. על פי המנגנונים השונים של אינטראקציה של פפטיד חלבון עם תאים, ישנן פעולות ספציפיות רבות. כגון מבחני ריבוי, שהם מהירים ורגישים, אך מעט פחות ספציפיים; נגד התפשטות כמו כן, מערכת האיתור פשוטה, רגישה וספציפית; מבחני הפחתת אפקט ציטופטי [2], המבוססים על תרופות בעלות פעילות אנטי-ויראלית כגון אינטרפרון, מגנים על תאים מפני נזק נגיפי, השיטה אינטואיטיבית ורגישה, אך עשויה להיות מופרעת מתתי-סוגי פפטידים. השיטות הנ"ל מבוססות על עלייה וירידה של מספר התאים כאינדיקטורים כמותיים ויעילים, ושיטות הספירה כוללות שיטת ספירה ישירה ושיטת ספירה עקיפה, האחרונה כוללת שיטת MTT, שיטת שילוב איזוטופ (3H, 14C) וכו'. בנוסף, קיימות בדיקות המבוססות על אינטראקציה עקיפה של פוליפפטידים של חלבון ביצה עם תאים, כגון שיטת השראת נוגדנים בשילוב עם איתור חיסוני [3], שיטת פירוק המושרה על ידי אנזים בשילוב עם תגובה אנזים [4] וכן הלאה. באופן כללי, לשיטות תרבית תאים יש יתרונות של רגישות וסגוליות, אובייקטיביות ומהימנות, אך גם חסרונותיהן ברורים. ראשית, מבחני ביו אינם יכולים לכמת מטבוליטים קטנים לא פעילים ולעקוב אחר הדינמיקה שלהם in vivo; שנית, הדגימות קיימות בעיקר בנסיוב של בני אדם או בעלי חיים, וההפרעה של חומרים אנדוגניים בסרום ותגובת ההצלבה של גורמים אנדוגניים אפשריים משפיעות על הספציפיות של השיטה. יתר על כן, לרוב נדרשים ציטוקינים בסף כדי להניע תהליכים ביולוגיים, מה שמפחית את רגישות השיטה; תרבות ארוכת טווח של תאי זן תלויים נוטה למוטציה המשפיעה על הספציפיות של הבדיקה.